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La préparation du matériel biologique

                        
  1. L'échantillon
  2. Le recueil
  3. Extraction des acides nucléiques
Résumé du cours

On peut utiliser beaucoup d'échantillons biologiques, le plus utilisé est le sang, car il est plus facile à prélever, soit sous forme totale ou partielle avec extraction des globules blancs. On peut aussi utiliser les urines, liquide céphalo-rachidien, morceaux organes, biopsie, tissus (tous), fœtus (cas de fausse couche), dépôts de sang sur papier buvard (chez le bébé). En médecine légale, n'importe quel prélèvement peut être utilisé (cheveux, prélèvement buccal, os, dents).

[...] Ligases Liaison Phospho-diester, utilisé en ligature des extrémités de l'ADN lors de la construction de vecteur non convenant. Lier de façon covalente 2 mol d'ADN en 1. Formation de Liaison Phospho- diester entre e3OH et 5P. L'enzyme la plus utilisée est la T4DNAligases, indispensable bouts francs. Les autres enzyme La Ptase alcaline et la T4 Polynucleotide kinase. [...]


[...] -ADN non coupé après électrophorèse, pas migration car gros poids moléculaire -Dans l'autre cas, les fragments seront nombreux, ils se touchent cela forme un smire. -ADN de phage, tout est bien différencié, les gros fragment en hauts, les petits en bas, cela permet de connaître taille d'un fragment inconnu ( en rouge sur le schéma ) grâce à échelle de Log, on reporte les tailles connues. Utilité en cas de maladies génétiques. III- Utilisation des enzymes de restriction carte de restriction On fait une carte de restriction, on coupe un fragment en deux pour connaître emplacement du site de restriction en mélangeant les enzyme. [...]


[...] Purification par précipitation à l'éthanol absolu, on le sèche puis repris dans une solution tampon Pour des tissus ou cellules: Traitement par détergent et protéases extraction phénol-choloroforme précipitation à l'éthanol absolu. II Préparation de l'ARN ARN est + sensible donc + difficile. Tout doit être stérile 3 groupes d'ARN: ARNm, ARNt, ARNr Les ARN sont extraits soit à partir des leucocytes sanguins ou à partir de cellules ou tissus Cellules ou tissus traites immédiatement ( ou congelés C ) détergent: SDS agent dissociant: isothiocyanate de guanine solution tampon, avec tampon acide ADN en solution aqueuse, alors que ARN+protéines à l'interface. [...]

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